በ PCR ግብረመልሶች ውስጥ ጣልቃገብነቶች ምክንያቶች

በ PCR ምላሽ ወቅት አንዳንድ ጣልቃ-ገብነት ምክንያቶች ብዙውን ጊዜ ያጋጥማቸዋል.
በ PCR ከፍተኛ ከፍተኛ ትብዛቶች ምክንያት ብክለት ከ PCRR ውጤቶች ጋር በተያያዘ በጣም አስፈላጊ ከሆኑ ጉዳዮች አንዱ እንደሆነ ተደርጎ ይቆጠራል.
ወደ ሐሰት-አሉታዊ ውጤቶች የሚመሩ የተለያዩ ምንጮች እኩል ነቃዮች ናቸው. አንድ ወይም ከዚያ በላይ የፒሲራ ድብልቅ ወይም የአድራሻው ምላሽ እራሱ የተደነገገው ወይም ጣልቃ ገብነት ከተገጠመበት ወይም ጣልቃ ገብነት ከተቀየረ የምርመራው አመልክ ሊከለከል ይችላል. ይህ ወደ ቅናሽ ብቃት እና አልፎ ተርፎም የሐሰት ውጤቶች ያስከትላል.
ከግድመት በተጨማሪ የኒውክሊክ አሲድ አሲድ ታማኝነት ማጣት የናሙና ማዘጋጀት በፊት በመላኪያ እና / ወይም በማጠራቀሚያ ሁኔታዎች ምክንያት ሊከሰት ይችላል. በተለይም ከፍተኛ የሙቀት መጠን ወይም በቂ ያልሆነ ማከማቻ ወደ ሴሎች እና የኒውክሊክ አሲዶች ጉዳት ሊያደርስ ይችላል. የሕዋስ እና ቲሹ ማሻሻያ እና የቲኤፍፊን ሴኬጅዲንግ የዲ ኤን ኤን ክፍፍል እና የማያቋርጥ ችግር በጣም የታወቁ ምክንያቶች (ቁጥሮች 1 እና 2 ን ይመልከቱ). በእነዚህ አጋጣሚዎች ጥሩ ማግለል እና መንጻት እንኳን አይረዳም.

ምስል 1 | በዲ ኤን ኤ ጸያጋማነት ላይ የኑሮ ስሜት
አግሮዝ ጄል ኤክስሮፎረስስ, ዲ ኤን ኤዎች ከፓፒሲን ክፍሎች የተገለሉ ጥራት በከፍተኛ ሁኔታ ተለያይቷል. በመጠጃ ዘዴው ላይ በመመርኮዝ የተለያዩ አማካይ አማካይ የክብደት ርዝመት ያላቸው ዲ ኤን ኤን ተገኝተዋል. ዲ ኤን ኤ በተገቢው ስፍራ በተቀዘቀዘ ናሙናዎች ውስጥ ሲቀዘቅዝ ብቻ እና በተደፈነ ገለልተኛ ገለልተኛ ውስጥ ብቻ. በጣም አሲድ አሲድ የመጠጥ ወይም ያልተስተካከለ, ቀለል ያለ አሲድ የተካተተ አሲድ የዲኤንኤ ከፍተኛ መጠን ያለው የዲ ኤን ኤ ምክንያት ነው. ቀሪው ክፍልፋይ በጣም የተከፋፈለ ነው.
በግራ በኩል, ቁርጥራጮችን ርዝመት ኪሎብስ ጥንዶች (KBP) ውስጥ ተገልጻል

ምስል 2 | የኒውክሊክ አሲድ targets ላማዎች ታማኝነት ማጣት
(ሀ) በሁለቱም ወጭዎች ላይ የ 3'-5 'ክፍተት በሁለቱም ወጭዎች ላይ እረፍት ያስከትላል ዲ ኤን ኤ ውስጥ ይደረጋል. የዲ ኤን ኤ ሲነስስ በትንሽ ቁርጥራጭ ላይ አሁንም ይከሰታል. ሆኖም, የዲኤንኤ ሰሪ ጣቢያ በዲ ኤን ኤን ቁርጥራጭ ላይ የሚጎድለው ከሆነ መስመር ላይ ማቆሚያ ብቻ ይከሰታል. በጣም ምቹ በሆነ ሁኔታ, ቁርጥራጮቹ እርስ በእርስ ሊተባበሩ ይችላሉ, ነገር ግን ምርቱ አነስተኛ እና ከዚህ በታች የማየት ደረጃዎች ደረጃዎች ይሆናሉ.
(ለ) በዋነኝነት መሠረቶችን ማጣት, በዋነኝነት በመጥፎ እና የክትትል ድራማ ቅነሳ ምክንያት የ H-Basts ቁጥር እና የቲም ቀንስ ወደ ቀንሷል. በተዘበራረቀበት ወቅት ቀደሚዎቹ ከ Matrius ዲ ኤን ኤ ውስጥ ይቀልጣሉ እናም ያነሰ አዕምሮዎች እንኳን ሳይቀሩ አይሆኑም.
(ሐ) በአጠገብህ የእግርህ መያዣዎች የቲ.ቲ.
በሞለኪውል ምርመራ ውስጥ ብዙውን ጊዜ የሚከሰት ሌላው የተለመደ ችግር ከ phenol-chololocrifter ውርድ ጋር ሲነፃፀር የ target ላማ የኒውክሊክ አሲዶች አነስተኛ ነው. በጣም ከባድ በሆኑ ጉዳዮች ይህ ከሐሰት አሉታዊ ነገሮች ጋር ሊገናኝ ይችላል. ብዙ ጊዜ ሊቀመጥ ይችላል, ግን ይህ ዘዴ በቂ ባልሆነ ኑክሊክ አሲድ በመለቀቅ ብዙውን ጊዜ ዝቅተኛ የፒሲራ ስሜታዊነት ያስከትላል.

በማይመቅለቅ ወቅት የፖሊሚኒስ እንቅስቃሴን መከልከል

በአጠቃላይ መከላከል እንደ ውህደት ሁሉ ወደ ንዑስ / PCR ውጤቶች የሚመሩ ሁሉንም ምክንያቶች ለመግለጽ እንደ መያዣ ፅንሰ-ሀሳብ ጥቅም ላይ ይውላል. በጥብቅ ባዮኬሚካዊ አስተሳሰብ, ኢንዛይሽኑ ኢንዛይም የተገደበ ነው, ማለትም ከዲ ኤን ኤሊያን ፖሊሚስ ወይም ከካኪው ጋር በተያያዘ ከዲኤንኤ ዲ ኤን ኤ ፖሊቲሜሜ ጋር በመተባበር የተገደበ ነው.
በናሙናው ወይም የተለያዩ ቋጥኞች ውስጥ ያሉ ንጥረ ነገሮች ኢንዛይናትን መካተት ወይም ፖሊቲኖቹን (ለምሳሌ ኤዴታ) በመግባት እና ወደ መቀነስ ወይም ወደ ሐሰት አሉታዊ የፒ.ሲ.ሲ.
ሆኖም, በምላሽ አካላት እና በ targets ላማ የተያዙ የኒውክሊክ አሲዶች መካከል ብዙ ግንኙነቶችም እንደ <PCR Ingsibitors> ተብሎም ተመድበዋል. አንዴ የሕዋስ ጽኑ አቋሙን በማግለዋል እና የኒውሊክ አሲድ ከተለቀቀ ናሙናው መካከል መስተጋብር እና በአከባቢው መፍትሄው ሊከሰት ይችላል. For example, 'scavengers' can bind single- or double-stranded DNA through non-covalent interactions and interfere with isolation and purification by reducing the number of targets that eventually reach the PCR reaction vessel.
በአጠቃላይ, የ PCR መከለክቶች ለክሊኒካዊ ምርመራዎች (ኦርጋኒክ አካላት, ግሊኮን, ካሪኮን, ካሪኮን, ካሪኮን, ካሪኮን, ካሲኤቭ (ፓኖዎች, ከባድ ብረቶች) እና አካላት ጥቅም ላይ ይውላሉ.

ይበልጥ የተስፋፋው PCR መከለክቶች ባክቴሪያ ያልሆኑ እና በዩዮርዮቲክ ሴሎች, በዲኤችታዊ ያልሆኑ ሕዋሳት, ዲ ኤን ኤ, ዲ ኤን ኤ እና የላቦራራቶሪ መሳሪያዎች ያሉ የቲሹ ትምህርት ቤቶች እና የላቦራራቶሪ መሳሪያዎች ሊገኙ ይችላሉ. ከውጭ በኋላ ወይም በኋላ የኒውክሊክ አሲዶች መንጻት የ PCR መከላከልን ለማስወገድ ተመራጭ ዘዴ ነው.
በዛሬው ጊዜ የተለያዩ አውቶማቲክ የመነሻ መሣሪያዎች ብዙ የእጅ ሥራ ፕሮቶኮሎችን ሊተኩ ይችላሉ, ግን የ 100% ማገገሚያዎች እና / ወይም የ targets ላማዎች መንጻት በጭራሽ አልተሳካም. ሊፈጠሩ የሚችሉ ሰዎች አሁንም በንፅህና ኒውክሊክ አሲዶች ውስጥ ሊገኙ ይችላሉ ወይም ቀደም ሲል ተፈጽመዋል. የመከላከያዎች ተፅእኖን ለመቀነስ የተለያዩ ዘዴዎች አሉ. ተገቢው የፖሊሜራር ምርጫ በቁጥጥር ውስጥ እንቅስቃሴ ላይ ከፍተኛ ተጽዕኖ ሊኖረው ይችላል. የ PCRR መከላከልን ለመቀነስ ሌሎች የተረጋገጡ ዘዴዎች ፖሊመር አካፋይ ማጎሪያ እየጨመሩ ነው ወይም እንደ BSA ያሉ ተጨማሪዎችን ይተግብሩ.
የውስጥ ሂደትን ጥራት መቆጣጠሪያ (IPC) መከልከል የ PCR ምላሾችን መከልከል ሊታይ ይችላል.
እንደ ኢታኖል, ኤዲታ, ኤድታ, ዎልታ, ኤስኤንኦል, SESCH, LESOPOL, SESOPOL, SESOPOL, SESOPOOL, ISOPopon, ISOPOPOL እና PHOL, ETAPOPOPOL, ISOPOPOL እና PHOL, ETAPOPOPOL እና PHOPOOL, በትኩረት ላይ በመመስረት, PCR ን (PCR) ን ያግብሩት.